全自動キャピラリーウェスタン Abby（アビィ）

リン酸化ターゲットをトータル(汎反応性) Abbyの仕様 規 格 ターゲットでノーマライゼーション　 内容 スペック 内容 スペック プローブ1: プローブ2: 同 一 サ ン プ ル で 最大サンプル数/測定 25 解像度 ±15 - 20 % (MW<20kDa) anti-EGFR anti-pEGFR EGF + - + - 分子量の等しい複数 最大サ ンプルの測定時間 <3時間 ±10 % (MW>20kDa) kDa タンパク質を検出 <RePlexで5時間 定量性CV <20% ハンズオン時間 30分 230 ダイナミックレンジ 2 - 3 log ウェスタンブロットがとてもシンプルになりました 必要サンプル量 0.3 - 1.2 µg (総タンパク質アッセイ) pEGFR 感度 ng (総タンパク質アッセイ) 0.6 - 1.2 µg (化学発光) 180 EGFR Low pg (化学発光) 必要サンプル容量 3 µL/well EGF処理および未処理A431 サイズ (分子量)範囲 分子量 2 - 440 kDa キャピラリー 5cm,100µm,400nl ウェスタンブロット法をすべての面で圧倒する ライセートにおけるプローブ CV (サイズ) <10% 重量 21 kg 116 1およびプローブ2でのEGFR 全自動シンプルウェスタンシステム お よ び p - E G F R 検 出 の CV (測定内) <15% 機器サイズ（閉) H 36 cm x W 36 cm x D 57 cm レーンビュー CV (測定間) <20%†(総タンパク質アッセイ) 機器サイズ（開) H 36 cm x W 53 cm x D 57 cm 化学発光検出専用の次世代シンプルウェスタンの <20%*(化学発光) 必要電源 100VAC,50/60Hz,5.0 amps †ピーク面積の割合 測定時の温度レンジ 18‒24 °C 最新機種が登場 *System controlを使用 新機能 測定時の湿度レンジ 20‒60% 相対、結露しないこと シンプルウェスタン用Compassソフトウェア A��� 同一キャピラリー内で最大2ラウンド レーン注釈機能を追加 全自動連続イムノアッセイのほか 総タンパク質アッセイを実行 アビィ プロービング サイクルごとに コントラストの 調整 分子量が 同じバンドも シンプルウェスタンのワークフロー 従来のウェスタンブロットよりも高感度 わけて表示 スタートから データ出力までわずか 3時間 シンプルウェスタン 従来のウェスタン サンプル、試薬調製 （専用プレートにサンプル、ラダー 抗体などを分注） 0.0 00 2 m g/m L 02 m g/m L 0.0 00 8 m g/m L 0.0 04 m g/m L 0.0 2 m g/m L 0.1 m g/m L 0.5 m g/m L 2.7 m g/m L 13 .5 m g/m L kDa 0.0 0 0.0 00 8 m g/m L 0.0 04 m g/m L 0.0 2 m g/m L 0.1 m g/m L 0.5 m g/m L 2.7 m g/m L 13 .5 m g/m L 30～45分間 230 180 Compass for SW キャピラリーカートリッジと プレートを装置にセット 116 上で図を作製して スタートボタンを押す そのまま図として 66 使用可 全てのステップはキャピラリー内で行われ、全自動化されています 必要な領域だけを キャピラリー内に 40 クロッピング マトリクス（ゲル）をロード Compass for SW上でアッセイ条件を確認しながら図を 4分間 スタッキングマトリクス セパレーションマトリクス 作製できます HEK293 ライセートで GSK3a を連続滴定し、シンプルウェスタン（左）と サンプルをロード 従来のウェスタンブロット（右）で GSK3a を検出しました。従来の 他の汎用ソフトウェア等、複数のソフトウェアを行ったり 1分間 ウェスタンブロットと比較して、シンプルウェスタンではより低い 来たりする必要がありません 高分子量 低分子量 サンプル濃度でシグナルが検出されましたが、どちらの手法でも高い 電気泳動 ライセート濃度でシグナルを検出しました （タンパク質を分子量ごとに キャピラリー内で分離） ウェスタンで最も検出感度の高い蛍光二次抗体が2021年の夏に登場! 時 25分間 間 UＶ光でタンパク質を 従来のウェスタン（2.5 log）を上回る Jess専用です キャピラリー内に固定 （キャピラリー内壁にある化学物質と シンプルウェスタンのダイナミックレンジ（＞4 log) タンパク質が光化学反応で共有結合し タンパク質が内壁にトラップされる） New GSK3aシグナル 業界最高感度の蛍光ウェスタン！ ゲルマトリクスを洗い流し 10,000,000 ブロッキング剤、一次抗体と反応 STELLAR 1,000,000 36分間 シンプルウェスタン 100,000 HRP標識二次抗体と反応 10,000 従来のウェスタン 30分間 1,000 超高感度のNIR/IR検出 (<pgレベル) 発光基質をロードし発光を 100 化学発光レベルの感度 CCDカメラで検出 15 10 分間 JESS化学発光 JESS STELLAR 他社 1 0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10 100 Protein 解析データの出力 HEK293 lysate (mg/mL) Purified DnaK spiked in 5分間 HeLa lysate < 1 pg < 1 pg < 数十 pg カートリッジ（廃液含む）と 従来のウェスタンブロットと比較して、シンプルウェスタンでは プレートを廃棄 Purified RNase A < 1 pg < 1 pg < 数十 pg 12 40 66 90 116 180 終了 ダイナミックレンジが 1.5 log 改善しています MW (kDa) Signal

PROTEINSIMPLE PRODUCT CATALOG A � � � は、RePlex と呼ばれる 1 回目のプロービングで結合した抗体を除去する新機能をもち 新たに別の抗体で 2回目のプロービング、または総タンパク質検出を行えます 総タンパク質ノーマライゼーション Abbyのアッセイ マルチプレックスとRePlex機能 連続イムノアッセイでピコグラムの感度を維持 L L L L L /m g/m /m g/m L /m L m mg g/m L /m /m m mg 1 m g ブ1 2 0.2 m g 0.1 m 0.0 5 0.0 1 0.2 0.1 m g 0.0 5 0.0 Load Matrix and Sample マトリックスとサンプルをロード ロー ーブ pg 7 p g pg pg 7 p g pg 230- kDa プ プロ kDa 50 16 . 5.6 1.9 pg kDa 50 16 . 5.6 1.9 pg 66- 230- 80- プローブ１ 230- 1 プローブ2 -HSP60 180- 180- Separation Matrix High MW 分離マトリクス 高分子 116- Stacking Matrix Low MW 分離マトリクス 低分子 40- -GAPDH 116- 116- キャピラリー内の Separate 分離 タンパク質は共有 66- -14-3-3 -DnaK -DnaK 結合で非可逆的に -Park7 貴重なサンプルを節約 66- 66- 結 合 し て い る RePlexアッセイを使用して ilize タンパク質のUV固定 サンプル調製のコスト削減 ためReP lex前後 Immob 40- 1回目でイムノアッセイを 研究スピードUP いずれでも同等な -14-3-3 行 い 、続 い て 同 一 12- ピコグラムの感度 キ ャ ピ ラ リ ー 内 で 40- 40- と直線性を実現 総 タ ン Imパmunopクrobe 質 を 抗体1で免疫プローブ 検出後、ノーマライズ 12- Target Protein HRP-labeled 標的タンパク質 HRP標識 14-3-3 HSP60 Primary Ab Secondary Ab 一次抗体 二次抗体 400,000 500,00 400000 R² = 0.9987 350000 7000000 14-3-3 300000 プローブ2 Quantitate Signal 標的1の解析データ APDH 400,000 300,000 プローブ2 G プローブ1 検出限界:1.7pg R² = 0.9979 250000 6000000 300,000 200000 プローブ1 5000000 200,000 Park7 150000 検出限界:2.6 pg RePlex（初めの免疫プローブ由来の抗体を除去） 200,000 100000 4000000 100,000 50000 100,000 0 3000000 0 10 20 30 40 50 60 抗体2で免疫プローブ（もしくは総タンパク質アッセイ） 0 0 DnaK (pg) 2000000 12 40 66 116 180 MW (kDa) 1000000 標的2の解析データ 同一キャピラリーで2連続でDnaKを検出したレーンビュー（上）および濃度と 2連続イムノアッセイで測定したHSP60、GAPDH、14-3-3 DnaKピーク面積の直線性評価（下） 0 0.01 0.05 0.10 0.20 およびPark7検出のレーンビュー（上）とグラフビュー（下） HeLaライセート濃度(mg/mL) Rawデータ ノーマライゼーション後 付属のCompass for SWで数回クリックするだけで さまざまな濃度のHeLaライセートの14-3-3と総タンパク質シグナル イムノアッセイの回数を簡単に変更することが （上）、およびRawデータおよびノーマライズされたシグナルが できます 示されています（下） いずれも必要な手間はプレートにサンプルと試薬 を入れるだけです ピーク面積の平均 シングルイムノアッセイ（3時間） 2連続イムノアッセイ（5時間） Chemiluminescence P1 ピーク面積 Chemiluminescence P2