Octetシステムによるコロナウイルスワクチンと治療法の開発促進

バイオレイヤー干渉法 (BLI) を用いたOctetシステム によるコロナウイルスワクチンと治療法の開発促進 イントロダクション これらの特徴により、ユーザーはアッセイやバイオセンサーの条件 を簡単に変更し、貴重なサンプルを再利用することができるので、 世界保健機関は2020年3月11日、新たなCOVID-19のアウトブレイク 迅速かつ低コストでアッセイの最適化を実現します。さらにユー をパンデミックと宣言しました。世界中で数百万人がこのウイルスに ザーは、ワクチンや生物治療薬の開発研究に適した、様々なアフィ 感染し、これまでに数十万人の死亡が報告されています。パンデミッ ニティキャプチャーおよび固相化法のセンサーを選択することがで クの疫学は急速に進歩しており、この病気の認可された治療法やワク きます。幅広いサンプルに適用でき、事前調製が不要なバイオセン チンがないことから、介入策開発の必要性がますます求められていま サーの表面に固相化された化学物質を表1に示します。 す。ワクチン探索の中心にあるのは、効果の可能性が最も高い候補を 決定するために多くの潜在的候補の迅速スクリーニングが可能な、最 新の生化学・分析技術です。COVID-19のゲノム配列が2020年1月に Biosensor Description Application 初めて共有されて以来、Octet®のデータは、コロナウイルスの生物 学、ワクチン、および抗ウイルス治療法の開発に関連する、ブレイ AHC Anti-Human ヒトIgGまたはヒトFc融合タンパク質を、 クスルーをもたらしたいくつかの出版物で取り上げられてきました。 Fc-Capture 精製または未精製培地中からキャプチャー し、様々なアナライトを用いたカイネティ Octet BLIプラットフォームは、下記のような利点を科学者に提供す クス分析またはエピトープビニング分析に ることにより、SARS-CoV-2の研究を加速するのに役立っています。 用います。 AMC Anti-Mouse マウスIgGまたはマウスFc融合タンパク質 Fc-Capture を、精製または未精製培地中からキャプ • 標的抗原、ワクチン、治療薬候補を迅速に選択し特徴づけるため チャーし、様々なアナライトを用いたカイ の、ハイスループットカイネティクスによる相互作用解析ソリュー ネティクス分析またはエピトープビニング ション 分析に用います。 • 抗体エピトープの特性評価とカバレッジ決定のための高速かつ柔軟 SA Streptavidin ビオチン化された分子を固相化し、カイ なプラットフォーム ネティクスまたはエピトープビニング分 析に用います。 • ワクチンやバイオ医薬品開発研究に向いている様々なバイオセン HIS1K Anti-Penta- 精製または未精製培地中からHisタグ付き サーによる効率的なワークフロー HIS タンパク質をキャプチャーし、標的アナラ • ワクチン力価、安定性、タイター測定など、上流および下流のワク イトを用いたカイネティクス分析を行うこ とができます。緩衝液、培地、または希釈 チン開発および製造における多用途なソリューション 溶解液中のHisタグ付きタンパク質の定量 • 直感的で使いやすいデータ分析ソフトウェアツール にも用いることができます。バイオセン サーは、ペンタHis抗体であらかじめコー ティングされています。 Octetでは、生体分子間相互作用を観察するために、検出面 (バイオセ FAB2G Anti-Human ヒトFabフラグメントおよびIgGと、標的抗 ンサー) 上の結合による光の干渉を測定するBio-Layer Interferometry Fab-CH1 2nd 原、Fc受容体、他のアナライトとのカイネ (BLI) 技術を利用しています。検出結果は結合レスポンスとしてリアル Generation ティクス分析。FabおよびIgGの定量にも用 いることができます。 タイムに観察されます。この装置は、96または384ウェルプレート中 のサンプルを、マイクロ流路のない環境で測定します。アッセイワー NTA Ni-NTA 緩衝液や希釈したマトリックス中でのHIS クフローには、ディスポーザブルなバイオセンサーをマイクロプレー タグ付きタンパク質の定量に用いることが できます。各種アナライトを用いたカイネ ト内のサンプルに浸しリアルタイムで相互作用を検出する、シンプル ティクス分析のためのHISタグ付きタンパ なDip and Read™ 測定によって行われます。このワークフローは、細 ク質のキャプチャーにも使用します。 胞培養上清、血清、血漿、その他培地などの複雑なマトリックス中の Protein A Fc-Capture ヒトを含む様々な種の、IgGおよびFc融合 標的分子の特異的なキャプチャーと分析を可能にするという点で、マ タンパク質のキャプチャーに用います。 イクロ流路ベースの技術よりも有利です。スクリーニングのために抗 体や他の組換えタンパク質を精製する必要性がなく、サンプルが目詰 表1：抗体ベースのカイネティクス解析、受容体結合およびエピトープビニン まりするリスクを回避することができます。 グアッセイに広く使用されているバイオセンサーの化学表面。すべてのバイオ センサーについての情報・選択ガイドは、Biosensor selection guideをご覧く ださい。

Octetは、様々なワクチン開発研究プログラム (HIV Reference 1, 2、イン Octetによるエピトープビニングフォーマットとアッセイガイダンス フルエンザReference 3、エボラウィルスReference 4、新型コロナウイルス Reference 5-15) と、ナノ粒子Reference 16、ウイルス様粒子 (VLP)Reference 17 A B C In-tandem assay Classical sandwich assay Premix assay および二重特異抗体Reference 18などのワクチン製剤技術の評価に広く 使用されています。Octetシステムはまた、リード候補の選択だけで Biosensor Biosensor Biosensor はなく、バイオプロセス開発と製造へのソリューションも提供しま す。このレビューでは、コロナウイルス研究とワクチン開発への取り 1 Ag 1 2 Coupled 1 Coupled mAb 組みにおける、Octetアッセイを使用した最近の研究成果の事例をま mAb (Ab1) (Ab1) Saturating Ag とめました。 3 mAb (Ab1) 2 2 Ag 3 Ag Ag Competing Sandwiching mAb (Ab2) mAb (Ab2) Premixed mAb + Ag (Ab2+Ag) コロナウイルス受容体の結合機構と交差反応性 の決定 D Antigen SARS-CoV-2 (あるいは2019-nCoV) は、他のコロナウイルスファミ Monomer Multimer リー、特にbetacoronavirus属 (SARS-CoV 2003) と遺伝的および形態学 的な特徴を共有しています。SARS-CoV-2は、ヒトアンジオテンシン変 mAbs mAbs 換酵素2 (ACE2) 受容体 (Reference 19) を介して宿主細胞への侵入を得 Crude Crude るために、グリコシル化されたホモ3量体クラスI fusionスパイク (S) タ Purified (Hybridoma supes, ( phage lysates) Purified Hybridoma supes, phage lysates) ンパク質を使用しています。SARS-CoV-2のS糖タンパク質は、MERS- CoVのような他の主要なコロナウイルスと比較すると、SARS-CoVと有 Binning Binning Binning Binning format format format format 意な構造的相同性を有しています。Sタンパク質は、宿主細胞膜とウイ ルス膜を融合させるために再編成を受ける、融合前準安定構造が存在 することが知られています。宿主細胞受容体へのS1サブユニットの結 Premix Classical sandwich In-tandem Classical sandwich In-tandem Premix In-tandem In-tandem 合は、融合前状態の三量体の不安定化を誘発し、そのタンパク質構造 変化によりS2サブユニットを介して宿主細胞膜との融合が開始されま PREMIX CLASSICAL SANDWICH IN-TANDEM す。宿主細胞受容体に結合するためには、S1の受容体結合ドメイン • 抗原濃度はKD以上である必要 • 抗原はバイオセンサーと結合し • 抗原はタグを使用して、また があります。 た抗体から急速に解離してはい は直接 (AR2G) バイオセン (RBD) は、ダウンコンフォメーションとアップコンフォメーションと ビニング形式に • プレミックス抗体は抗原より けません。 サーにロードできます。 おける考慮事項 も過剰である必要があります。 • AHC / AMCバイオセンサーを使 • 「フリー抗原」が競合する抗体 • AHC / AMCバイオセンサーを使 用する場合、不飽和バイオセン に結合しないように、最初の抗 呼ばれる、受容体結合領域を隠す、あるいは提示する、ヒンジのよう 用する場合、不飽和バイオセ サー表面をブロックする必要が 体は飽和して抗原に結合したま ヱサー表面をブロックする必 あります。 まである必要があります な構造変化を経る必要があり、それは受容体結合へのアクセスを可能 要があります。 • バイオセンサーに結合された弱 • 飽和抗体として提示された弱 い親和性/速い解離の抗体は、あ い親和性 / 速い解離の抗体は にし、またワクチン開発のための重要な抗原ターゲットとしてそれ自 いまいなデータにつながる可能 あいまいなデータにつながる 性があります 可能性があります。 体が提示されます。 • カイネティクススクリーニング • 抗体間の交差反応がないことを • AR2Gバイオセンサーへの抗原 Wrappらにより、融合前コンフォメーションにおけるSARS-CoV-2 S三 からおおよそのKDを求める必要 確認します。 の直接結合は、抗原の不活性化 推奨される があります。 • SAまたはAR2Gへのカップリング につながる可能性があります。 量体の構造が、クライオ電子顕微鏡法による最初の構造解析の一つと 初期の最適化 • 抗体間の交差反応がないことを 後に抗体に活性があることを確 固相化後に抗原に活性があるこ 実験 確認します。 認します。 とを確認してください。 して明らかにされました (Reference 12) 。彼らは、SARS-CoV-2 Sタン • SAまたはAR2Gへのカップリン • セルフブロッキングを確実にし • セルフブロッキングを確実にし パク質の全体的な構造がSARS-CoV Sとほぼ類似しているのに対し、 グ後に抗体に活性があることを てください。 てください。 確認します。 RBDのダウンコンフォメーションの間に違いが存在することを示しま • セルフブロッキングを確実にし てください。 した。 Wallsらによって、SARS-CoV-2スパイク糖タンパク質複合体の別のク ライオ電子顕微鏡構造が明らかにされました (Reference 10) 。この研 図1：エピトープビニングアッセイフォーマットと最適なエピトープビニング アッセイフォーマットを選択するための推奨ガイドライン。Octetシステム 究では、SARS-CoV-2 S糖タンパク質は、S1/S2サブユニット間境界は は、クロス競合評価のための複数のアッセイフォーマットを可能にし、エピ 生合成中に処理されるfurin切断部位を有し、これはこのウイルスを トープビニングのための専用のハイスループットソフトウェア解析ツールを提 SARS-CoVおよび他のSARS関連CoVと区別することを示しました。また 供しています。 (A) In Tandemアッセイ。抗原はバイオセンサー上に固相化さ Octet結合アッセイを用いて、SARS-CoV-2 SとSARS-CoV Sの受容体結 れ、その後、それぞれ飽和mAb (Ab1) と競合mAb (Ab2) の結合が行われます。 (B) Classical Sandwichアッセイ。あるmAbをバイオセンサーに固定化し 合ドメインは、ヒトACE2と同じような結合親和性で結合することが示 (Ab1) 、このmAbを用いて抗原をキャプチャーした後、2つ目のサンドイッチ されました。同様の観察が、SARS-CoV-2 S RBDの高分解能結晶構造に mAbを試験します (Ab2) 。 (C) Premixアッセイ。あるmAbをバイオセンサーに より、Joyceらによって報告されています (Reference 5) 。さらにこの 固定化し(Ab1)、抗原と大過剰モル濃度の2つ目のmAb (Ab2) を含む、プレミッ 研究では、SARS-CoVおよびMERS-CoV受容体結合ドメイン (RBD) と相 クス溶液にバイオセンサーを浸します。 (D) 最適なエピトープビニングアッセ イフォーマットを選択するためのガイダンス。クロス競合スクリーニングの開 互作用することが知られている抗体を用いて、SARS-CoV-2への結合活 発および分析についての詳細は、Octet assay guideをお読みください。 性についてOctetのカイネティクスアッセイを行っています。プールの うち240CDおよびCR3022の2つの抗体のみが、SARS-CoV-2 RBDに対し て低nMでの結合親和性を示しました。しかしこれらの2つの抗体 また結晶構造解析の結果、CR3022はSARS-CoVとSARS-CoV-2の両方に は、Octetのクロス競合アッセイによると、SARS-CoV-2 RBDの同じ結 保存されているRBDの部位に結合し、交差反応性を示しました。しか 合部位に対して競合していました。クロス競合またはエピトープビニ し本研究で同定されたSARS-CoV-2と、これまでの構造データから得ら ングアッセイは、各モノクローナル抗体 (mAbs) が結合する抗原領域ま れたSARS-CoVおよびMERS-CoVのエピトープ領域を比較したところ、 たはエピトープに基づいて、ビンに抗体をセグメント化するために使 CR3022はSARS-CoV-2 S内の新規エピトープに結合していることが明 用することができます (図1) 。さらにOctet競合アッセイにより、 らかになりました。このエピトープ領域内に導入された特異的なRBD ノックアウト変異体 (384位置の糖鎖シークオン) は、CR3022と240CD SARS-CoV-2 RBDに結合した240CDまたはCR3022抗体は、ACE2の認識 の両抗体の結合を排除していることが、両抗体がエピトープを共有す を阻害しないことが明らかになりました。 ることを確認したOctetデータにより示されました。 2

受容体結合と細胞への侵入におけるSARS-CoV-2のスパイク構造を理解 Octet BLI競合アッセイは、CR3022がSARS-CoV-2 RBDのACE2結合部 するために、SARS-CoV-2、SARS-CoV、およびMERS-CoVの三量体ユ 位と競合しないことを示し、ACE2結合部位とは異なるエピトープに結 ニットに結合したCR3022の構造がモデル化されました (Reference 5)。 合していることを示しました (図2B) 。Wrappらは同様に、以前に発表 RBDがダウンコンフォメーションにあるときには、CR3022エピトープ されたSARS-CoV-2 RBD結合抗体の別のセット、S230、m396、および は隣接するスパイクプロモーターによって妨害されていますが、アッ 80RをSARS-CoV-2 Sタンパク質と一緒に調べました (Reference 12) 。 プコンフォメーションではよりアクセス可能であることが示されまし オクテット結合アッセイでは、SARS-CoVとは異なるエピトープを介 た。Octetアッセイにより、非安定化されたS-糖タンパク質 (S1) のコン して認識されるためか、有意な結合活性の欠如が示されました。Sun フォメーションへCR3022の結合、またS2 P三量体へのはるかに弱い結 らは、SARS-CoV S1またはRBDタンパク質を用いて、マウスおよびウ 合が観察されました。最小限のタンパク質分解、あるいは受容体結合 サギを免疫して作製したいくつかのpAbsおよびmAbsは、SARS-CoV-2 により、CR3022の不明瞭なエピトープへの結合が変化すかどうかを評 pseudoviruse (PSV) において良好な交差中和活性を示さなかったこと 価するために、S2三量体をトリプシンで処理するか、またはACE2とイ を報告しています。しかしこれらの抗体は、SARS-CoVウイルスに対 ンキュベートしました。S2 P三量体をヒトACE2でインキュベートして して強力な中和活性を示し、SARS-CoV RBDに対する高親和性の結合 も、CR3022結合に劇的な影響は与えませんでした。しかしS2 Pコン を示しました (KD ~9-200 pM) (Reference 8) 。これらの結果は、SARS- フォメーションのトリプシン処理は、非安定化S糖タンパク質での結合 CoV中和活性やRBD結合を示す抗体が、RBDの高い配列相同性にもか と同様の結合レベル増加をもたらしました。この結合レベルは、タン かわらず、必ずしもSARS-CoV-2への活性の必須条件ではないことを示 パク質分解の増加と相関があるため、CR3022結合エピトープが構造内 しており、SARS-CoV-2のRBDを特異的に標的とする新規抗体の開発が 部に埋め込まれているような特性であることが推測されました。同様 必要であることを示唆しています。 の観察は、SARS-CoV-2 RBDに結合した中和抗体CR3022の結晶構造を 用いて、Yuanらによって報告されています (Reference 14) 。Octetの Wangらは、SARS-CoV-2およびSARS-CoVウイルス活性に対して中和 結合データは、SARS-CoVとSARS-CoV-2 RBDの間に高い配列保存性が 力を有するヒトモノクローナル抗体の発見を報告しました (Reference あるにもかかわらず、CR3022 FABsはSARS-CoV-2 RBDよりも100倍以 11) 。免疫化トランスジェニックマウスに由来するSARS S ハイブリ 上高い親和性でSARS-CoVを結合することを示しました。これはおそら ドーマを含む上清コレクションからのスクリーニングで得られた く上記の2つのエピトープ間で保存されていない残基によります。in 47D11は、SARS-CoVおよびSARS-CoV-2 pseudotyped VSVの両方に対 vitroでのマイクロ中和アッセイでは、CR3022はSARS-CoVに対しては して交差反応性および中和活性を示しました。Octetを用いた研究で 中和活性が高く、SARS-CoV-2では中和活性が低いことが示されました は、47D11は、SARS-CoV-2のSectoドメイン (KD = 10.8 nM) と比較し が、これはRBDの結合親和性の低さと一致します。これらの構造研究 て、SARS-CoVのSectoドメインに高い親和性 (KD = 0.745 nM) の結合を により、SARS-CoV-2が体液性免疫応答の標的となるメカニズムに対し 示しましたが、SARS-CoVおよびSARS-CoV-2のRBD結合ドメインへの ての知見が得られ、また相互防御的なnAbs創薬に利用できる可能性の 結合については似たような結合親和性が報告されているため、2つの ある、SARS-CoV-2とSARS-CoVの間で保存され構造内部に埋め込まれ ウイルス受容体結合モチーフ (RBM) 構造の間のエピトープアクセス性 の違いをさらに検証しています。加えて、これまでに報告されている ているエピトープが共有されていることが明らかとなりました。 他の例と同様に、47D11はSARS-CoVやSARS-CoV-2 RBDと競合せず、 受容体ブロッキングとは異なるモードで中和されていることが示唆さ 中和抗体の開発 れました。この交差中和抗体は、共通エピトープを標的としているこ とが報告されており、SARS-CoV-2の予防や治療に応用できる可能性 中和抗体 (nAbs) は現在の治療法の中でコロナウイルス感染症に対して があります。 最も効果的な治療法の一つであると考えられ、緊急に必要とされてい ます。SARS-CoV RBDを標的としたいくつかのnAbsでは、in vivoで有 Pintoらは、SARS-CoV生存者からnAbsのスクリーニングを行いました 意な抗ウイルス活性を示すことが、動物モデルでウイルス力価を低下 (Reference 7) 。このスクリーニングで得られた8種類のmAbsは、 させることにより明らかにされています。しかし交差反応性を有する SARS-CoVおよびSARS-CoV-2 Sタンパク質をトランスフェクションし nAbsが利用できれば、一本鎖RNAウイルスに典型的なウイルス変異に たCHO細胞の両方に結合し、そのうちS303、S304、S309、および 対抗できる、持続的に利用できる治療薬の鍵となる可能性がありま S315は、SARS-CoVおよびSARS-CoV-2 RBDの両方を認識しました。 す。 Octetデータにより、S309は両SドメインどちらにもnMレベルの親和 性で結合し、SARS-CoVおよびCoV-2の pseudovirus、本物のSARS- SARS-CoVとSARS-CoV-2の2つのスパイク (S) タンパク質の間には80% CoV-2に対しても同等の中和力を示すことが示されました。 程度の配列類似性があることから、SARS-CoVのスパイク (S) タンパク S309は、受容体結合モチーフ (RBM) とは異なる、SARS-CoV-2のRBD 質の免疫応答から得られた抗体が、新しいSARS-CoV-2との交差反応 上のタンパク質/グリカンエピトープを認識し、アップ状態とダウン 性を保持するかどうかを理解することは、治療用抗体や予防ワクチン 状態の両方にアクセス可能であると、構造データより考えられます。 の開発に重要な洞察と指針を提供することになります。 Octet BLI競合アッセイは、S309 FabおよびIgGのSARS-CoV-2 RBDへ Tianらの先駆的な研究では、CoV-2 RBDを発現および精製し、RBDを の結合が、ACE2受容体のSARS-CoV-2 Sタンパク質への結合を阻害し 標的としてSARS-CoV に対して強力な中和活性を発揮することが知ら ないことを示しました。 れている、いくつかのSARS-CoV特異的中和抗体の結合を試験しまし た (Reference 9) 。SARS-CoV nAbsであるm396、CR3014、 CR3022、およびMERS-CoV nAbであるm336を、SARS-CoV-2 RBDの 認識について試験しました (図2)。ほとんどの抗体はSARS-CoV-2 RBD への有意な結合を示しませんでしたが、SARS-CoV患者から単離され たCR3022は6.3 nMの親和性 (konは1.84×105 Ms-1、koffは1.16×10-3 s-1) で結合しました。 3

A B 図2：SARS-CoV-2 RBDに対するSARS-CoV抗体の相互作用の特性解析。 (A) Octetにより測定した、SARS-CoV-2 RBDと、ACE2あるいは抗体との結合プロファイ ル。 (B) CR3022およびACE2と、SARS-CoV-2 RBDとの競合。競合分析のために、SARS-CoV-2 RBD をStreptavidinバイオセンサー上に固相化し、次いでACE2を作 用させた後に、ACE2のみ、CR3022＋ACE2、またはACE2＋アイソタイプ抗体コントロールのいずれかと反応させました。図はReference 9からの転載です。 mAbsのパネルセットで認識されるエピトープについてより多くの洞 Wuらは、SARS-CoV-2 RBDを標的とするシングルドメイン抗体の生成お 察を得るために、OctetエピトープビニングアッセイによるSARS-CoV よび試験を報告しました (Reference 13) 。SARS-CoV-2 RBDおよびS1を およびSARS-CoV-2 RBDに存在する抗原性部位のマッピングが実施さ 抗原として用いたパンニングにより、SARS-CoV-2 RBD上の5種類の中和 れました。Octetエピトープビニング解析により、mAbが標的とする エピトープまたは非中和エピトープを標的とする抗体が同定されまし SARS-CoV RBD内の4つの抗原性領域が同定されました。これらの知見 た。18個のヒトシングルドメイン抗体を、Octetシステムを用いた競合 に基づき、異なる抗原性領域を標的としたmAbの組み合わせについ 結合アッセイで試験した結果、それらが互いに競合を示さない3つの競 て、中和力と相乗効果の可能性について試験を行ったところ、S304あ 合グループ (グループA、B、C) に分けられることを彼らは発見しまし るいはS315と、S309の組み合わせは、SARS-CoV-2に対する中和力を た。SARS-CoV-2 S1をパンニング抗原として用いライブラリーから同定 増強することが示されました。この研究で同定されたS309は、複数の したシングルドメイン抗体n3130は、pseudotype ウイルスおよび生ウ sarbecovirusに対して幅広い中和活性を示し、有効な治療薬候補とし イルスの両方に対して強力な中和活性を示し、SARS-CoV-2 S1および て期待されています。 RBDドメインへの強い結合を示しました。また、SARS-CoV-2 RBDが SARS-CoVやMERS-CoVと比較してユニークな免疫原性プロファイルを示 Panらは、SARS-CoV-2のRBDドメインを使用して、馬の抗血清から中 したこともこの研究では報告されており、SARS-CoV-2に対する有効な 和抗体を作製しました (Reference 6) 。馬の抗血清から単離された ワクチン開発に重要な意味を持つと考えられます。 F(ab')2は、SARS-CoV-2に対して～25μg/mLのEC80で中和活性を示し たと報告されています。Octet BLIのカイネティクス分析はまた、76 nMの親和性でのF(ab')2へのSARS-CoV-2受容体の結合を確認しまし た。抗血清からのF(ab')2のアフィニティー精製により、SARS-CoV-2 に対する中和活性 (EC80 = 0.18 μg/mL) が向上し、またOctet BLIで測 定した結合親和性 (0.76 nM) も増加しました。これはRBD特異的 F(ab')2がSARS-CoV-2の治療薬候補になる可能性を示唆しています。 4

ウイルス侵入を阻害するペプチド阻害剤の設計 まとめ と検証 親和性の特性評価、中和性、競合性の研究は、新型SARS-CoV-2に対 保護作用を持つ抗体に加えて、ペプチドおよび低分子阻害剤も、 する治療法やワクチン開発のための、高親和性で中和可能性のある SARS-CoV-2 RBDを標的にしてウイルスの侵入を防ぐための阻害戦略 リード候補の選択に不可欠です。カイネティクス解析は、親和性だけ として使用可能です。Zhangらは、SARS-CoV-2 S受容体とACE2タン ではなく、親和性の元となる結合および解離の詳細なパラメータを調 パク質の複合体の結晶構造を元に、結合界面にまたがるACE2 PD α1ヘ べます。一方クロス競合アッセイは、より最適な候補の同定を可能に リックスに基づいて発見された、23-merペプチドインヒビター します。上記の研究に加えて、他のコロナウイルスのメンバーや関連 (SBP1) の設計および開発を研究しました (Reference 15) 。SARS- する種を特徴づけ、調査するために、研究者はOctetアッセイを利用 CoV-2 RBDへのペプチドの結合の標的特異性を試験するために、Octet してきました。これらの観察と結果は、SARS-CoV-2に対する現在の BLIを使用しています。SPB1は、47 nM (kon = 4.69 × 104 M-1 s-1 および 治療戦略の実施と枠組み作りのために非常に貴重なものでした。表2 k は、現在および今までのコロナウイルス研究において、Octetアッセ off = 2.2 × 10-3 s-1) の親和性でRBDに結合し、この結合親和性は、全 長ACE2のSARS-CoV-2 RBDへの結合の強さに匹敵します。したがって イを使用している研究についていくつかを選択し、要約したものです SBP1は、SARS-CoV-2表面のスパイクタンパク質をカバーすること (Reference 20-27) 。これらの研究すべてにおいて、すぐに使える多様 で、ACE2の結合を打ち負かす新たな治療戦略となる可能性がありま なバイオセンサーケミストリーの可用性と、Octetシステムの使いや す。 すさを組み合わせることで、ユーザーが結果を得る時間を大幅に短縮 し、現在のパンデミックに対するワクチンや治療法のための継続的な 探索を進めることが可能になりました。 Analyte(s) Immobilized ligand(s) Virus species Assay focus Biosensor Reference ACE2 Fc-tagged SARS CoV-2 RBD SARS CoV-2 Cross-reactivity and receptor binding AHC 12 ACE2 SARS-CoV-2 SB SARS-CoV SB SARS CoV-2 Receptor binding HIS1K 10 mAb, MERS S protein, SARS CoV-2 S1, SARS CoV-2 SARS CoV-2 VHH and mAb binding assessment, AR2G 13 VHH RBD Epitope binning Fab, IgG SARS CoV-2 S protein, SARS SARS CoV-2 FAB, IgG binding characterization HIS1K 14 CoV-2 RBS ACE2, SARS-CoV RBD SARS-CoV-specific SARS CoV-2 Cross-reactivity binding SA 9 neutralizing antibodies Antibodies Biotin-Recombinant SARS- SARS CoV-2 Neutralization antibody assessment SA 8 CoV S1 protein FAB, ACE2, SARS S mAb, ACE2 SARS CoV-2 Receptor binding, antibody AHC, HIS1K 5 protein reactivity, competition assays SARS CoV-2 RBD Inhibitor Peptide SARS CoV-2 Peptide inhibitor development SA 15 mAb S1B and SARS Secto domains SARS CoV and Antibody reactivity assessment HIS1K 11 SARS CoV-2 SARS CoV-2 RBD, mAbs, SARS CoV-2 RBD, SARS CoV and Antibody binding characterization, Protein A, 7 SARS CoV RBD, mAbs, SARS CoV RBD SARS CoV-2 epitope binning, competition binding HIS2, HIS1K FAB Coronavirus S proteins Biotin-9OAc6SLN SARS CoV and Receptor binding SA 20 MERS CoV MERS-5HB fusion Biotin-peptide (MERS-HR2P) MERS CoV Protein Inhibitor development SA 21 inhibitor mAb, MERS S protein mAb, MERS S protein MERS CoV Epitope binning and Receptor SAX, 22 binding Protein A MERS-CoV S mAbs MERS CoV Antibody reactivity measurements, AHC, HIS1K 23 competition assays MERS-CoV NTD, mAb MERS CoV Antibody reactivity measurements AHC 24 mutants MERS S-protein mAbs MERS CoV Antibody reactivity measurements AHC 25 RBD/S1/S2 antigen Vaccine-induced mouse MERS CoV Antibody reactivity and epitope AHC, HIS1K 26 monoclonal IgGs binning FABs MERS-CoV RBD MERS CoV Epitope binning HIS1K 27 表2：コロナウイルス研究およびワクチン開発におけるOctet BLIアッセイの例。 5

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