MonoSpin（微量サンプル用固相抽出カラム）

微量試料の精製・濃縮用カラム　MonoSpinシリーズ 2020年1月改訂 Contents MonoSpin とは........................................................................2 MonoSpin シリーズラインアップ...................................4 MonoSpin シリーズの特長.................................................5 アプリケーション...................................................................7 リン酸脂質吸着カラム MonoSpin Phospholipid .................................................. 13 抗体精製用カラム MonoSpin ProA , ProG ...................................................... 16 MonoSpin 96 ウェルプレート........................................ 20 アクセサリー......................................................................... 21 MonoSpin シリーズ価格表.............................................. 22 微量試料の精製・濃縮カラム MonoSpin Solid Phase Extraction Spin Column 微量サンプルの精製濃縮を 簡易な遠心処理により実現

MonoSpin について MonoSpin MonoSpinは、均一な連続孔を持つシリカモノリスを用いた前処 理用スピンカラムです。遠心操作により、生体試料などの微量 サンプルを効果的に前処理します。 【特長】  遠心処理による簡単な操作  高い通液性により高速処理が可能 シリカモノリス  100 µL以下の溶出量でも優れた再現性（S型） MonoSpin 操作方法 固相抽出における通液操作を短時間の遠心処理で行います。 ハンドリングを含めた処理時間は10分以内です。 遠心 遠心 遠心 遠心 コンディショニング 吸着 洗浄 溶出 遠心操作による処理 形状 MonoSpinシリーズは、最大800 µLまでのサンプルに最適なS型と、それよりも大きな1～8 mLのサンプルに最適な L型、多検体処理用の96ウェルプレート型を用意しています。 官能基の種類によって対応できる形状が異なりますので、詳しくは4ページを参照してください。 S型 L型 ● ディスクサイズ：Φ 4.2× 1.5 mm ● ディスクサイズ：Φ 9× 3 mm ● サンプル容量：800 µL まで ● サンプル容量：8 mL まで ● 溶出液量：50 ～ 800 μL ● 溶出液量：0.5 ～ 8 mL ● 使用時遠心力：2,000 ～ 10,000×g ● 使用時遠心力：1,000×g 注）MonoSpin ProA, MonoSpin ProG は 形状が異なります。 詳しくは16ページを 96 ウェルプレート型 参照してください。 ●サンプル容量：800 μL まで ●溶出液量：50 〜 800 μL ●使用時遠心力：1,000 〜 5,000 ×g （減圧吸引法でも使用可能） 注）MonoSpin ProA, MonoSpin ProG は仕様が異なります。 詳しくは 16 ページを参照してください。 2

シリカモノリス ～粒子でも、メンブレンでもない新しい分離媒体～ シリカモノリスは、ケイ酸エチルから合成された均一な連続孔を有する一体型のシリカゲルです。粒子とは異なり 分離剤がディスク状に成型されています。シリカモノリスは貫通孔となるスルーポアと骨格表面にある微細な孔の メソポアを持つため、高い通液性と大きな表面積を有します。そのため、高い捕集率と優れた吸脱着特性を有した 分離媒体として注目されています。 連続孔（スルーポア） 骨格に細孔（メソポア） シリカモノリス構造 粒子充填タイプの前処理カラムと異なる点 ディスク状に成型されたシリカモノリスは、固相カラムなどの前処理カラムを作製する際、粒子を留めるための フィルターを用いる必要がありません。また、非常に大きな表面積を有するため、分離剤のボリュームも小さくする ことが可能です。そのため、溶液通過時にカラム内に液残りが生じにくく、試料液回収時に微量溶出も可能です。 また、高い通液性を有しているにもかかわらず、速い試料分散性、分離速度を有しているため、迅速処理に適した 分離媒体です。 シリカモノリス 粒子充填型 フィルター不要 フィルター必要なため 分離剤小型化 液残りが発生 分離剤のベッドボリューム ： 小さい 分離剤のベッドボリューム ： 大きい カラム内の試料拡散 ： 速い カラム内の試料拡散 ： 遅い 分離速度 ： 速い 分離速度 ： 遅い 3

MonoSpin シリーズラインアップ ＊ MonoSpin C18/C18 FF S L 96 MonoSpin Ph S オクタデシル基を結合し、逆相分配相互作 フェニル基を化学修飾した逆相モードタイプ 用をもつカラムです。生体試料中薬剤の抽 です。C18より弱い疎水性を利用し、より選 出や、ペプチドサンプルの脱塩・濃縮に最 択性の高い前処理を行うことが可能です。 適です。ハイフロー（FF）仕様も用意してい 生体試料中からの疎水性薬物の回収に適 ます。 ＊：MonoSpin C18 FFはS型のみです。 しています。 MonoSpin C18-AX S 96 MonoSpin C18-CX S 96 オクタデシル基と4級アンモニウム基の両 オクタデシル基とベンゼンスルホン酸基を結合 方を化学修飾したミックスモードタイプで したカラムです。疎水性相互作用とイオン交換 す。高塩濃度生体試料でも確実にサンプ 作用が働きます。血清・尿中の解離している塩 - 基性薬物の精製に適しています。MonoSpin ルを保持することができます。酸性薬物の C18やSCX単体と比べ、高いクリーンアップ効 回収に適しています。 果があります。 MonoSpin SAX S L 96 MonoSpin SCX S L 96 4級アンモニウム基を結合したカラムです。 プロピルベンゼンスルホン酸を結合したカ 強陰イオン交換作用と弱い疎水性相互作 ラムです。強陽イオン交換作用と疎水性相 用を併せ持ちます。酸性薬剤などの抽出 互作用を併せ持ちます。塩基性化合物の に最適です。 精製に最適です。 MonoSpin NH2 S L 96 MonoSpin CBA S L 96 アミノプロピル基を結合したカラムです。 カルボキシル基を結合したカラムです。 HILICモードによる、糖鎖や親水性化合物 強塩基性化合物の精製に最適です。 の精製・濃縮に最適です。 MonoSpin Amide S 96 MonoSpin PBA S 96 フェニルホウ酸を結合した選択性の高いカ アミド基を結合したカラムです。HILICモード ラムです。カテコールアミンなどのシス型ジ による、糖鎖や酸性から塩基性まで幅広い オールを有する化合物に対する選択的な 親水性化合物の抽出に最適です。 抽出に最適です。 MonoSpin TiO S MonoSpin Trypsin S 二酸化チタンをコーティングしたカラムです。 タンパク質消化酵素であるトリプシンを固 TiO2 リン酸基を有する化合物の抽出に最適です。 定化したカラムです。タンパク質の迅速消 化が可能になります。 MonoSpin ME S L MonoSpin Phospholipid S L ・・・・13ページ参照 TiO シリカモノリスに二酸化チタンと二酸化ジルコ COOH 2 イミノ二酢酸基を結合したカラムです。 ニウムをコーティングしたリン脂質吸着用カラ N ZrO2 試料中の微量金属の回収に最適です。 ムです。簡便な前処理により試料中の COOH リン脂質を吸着することができます。 MonoSpin ProA S L 96 ・・・・16ページ参照 MonoSpin ProG S L 96 ・・・・16ページ参照 Protein A を固定化したアフィニティ担体で Protein G を固定化したアフィニティ担体 ProteinA す。迅速に抗体を精製することが可能です。 ProteinG です。迅速に抗体を精製することが可能 です。 S ：S型カラム製品 L ：L型カラム製品 96 ：96ウェルプレート型製品 4

MonoSpin シリーズの特長 微量サンプルの精製、濃縮を実現 MonoSpinシリーズは高い通液性を有するため、遠心操作のみでサンプルの迅速な濃縮・精製が可能です。 また、少ない溶液量で溶出が可能であり、微量サンプルを希釈することなく回収できます。エバポレーションなどでの 濃縮・乾固の操作も不要です。 S型 MonoSpin PBAで精製 サンプル液量 500 µL 未処理 溶出量 500 µLの場合 溶出量 50 µL（10倍濃縮）の場合 Conditions Column ：Inertsil ODS-3 （5 µm, 150×2.1 mm I.D.） Col.Temp. ：35 ℃ Eluent ：50 mM Phosphate buffer (pH 5.6) Injection Vol. ：5 µL 50 mg/L EDTA, 600 mg/L IPCC-008, -10% Methanol Detection ：ECD Pulse Mode Flow Rate ：0.3 mL/min 前処理方法などは11ページを参照してください。 L型 血清試料をMonoSpin L C18 で精製 サンプル液量 5,000 μL 未処理 溶出量 500 μL (10倍濃縮） 0 2 4 6 8 10 0 2 4 6 8 10 Time (min) Time (min) Conditions Column ：Inertsil ODS-3 （5 µm, 150×4.6 mm I.D.） Col.Temp. ：40 ℃ Eluent ：CH3CN/3 mM KH2PO4, 27 mM SDS= 48 / 52 Injection Vol. ：1 µL Flow Rate ：1.0 mL/min Detection ：230 nm S型、L型 ともに高い濃縮効果が得られます。 5 0.00 0.10 0.20 0.00 0.10 0.20

各種MonoSpinにおける物性一覧 S型 ／ 96 well型 L型 表面積 品名 官能基 スルーポア メソポア スルーポア メソポア (m2/g) 負荷量（Ｓ型の場合） (µm) (nm) (µm) (nm) MonoSpin C18 オクタデシル基 5 10 10 10 350 100 μg アミトリプチリン MonoSpin C18 FF オクタデシル基 20 15 10 10 300 50 μg アミトリプチリン MonoSpin Ph フェニル基 5 10 ー ー 350 100 μg アミトリプチリン MonoSpin C18-AX オクタデシル基、 4 5 10 ー ー 350 100 μg イブプロフェン 級アンモニウム MonoSpin C18-CX オクタデシル基、 5 10 ー ー 350 100 μg アミトリプチリン ベンゼンスルホン酸基 MonoSpin SAX トリメチルアミノプロピル基 5 10 10 10 350 100 μg イブプロフェン MonoSpin SCX プロピルベンゼンスルホン酸基 5 10 10 10 350 100 μg アミトリプチリン MonoSpin NH2 アミノプロピル基 5 10 10 10 350 100 μg マルトペンタオース MonoSpin CBA カルボキシル基 5 10 10 10 350 100 μg アミトリプチリン MonoSpin Amide アミド基 5 10 ー ー 350 100 μg アンジオテンシンⅡ MonoSpin PBA フェニルホウ酸 5 10 ー ー 350 100 μg ドーパミン MonoSpin TiO 二酸化チタン 20 15 ー ー 200 40 μg アデノシン一リン酸 MonoSpin Trypsin トリプシン 5 10 ー ー 100 ー ― MonoSpin ME イミノ二酢酸基 5 10 10 10 350 25 μg Cuイオン MonoSpin 二酸化チタン、 Phospholipid 5 10 10 10 350 10 μL ヒト血清 二酸化ジルコニウム MonoSpin ProA Protein A 2 60 2 60 ー 400 μg ヒトIgG MonoSpin ProG Protein G 2 60 2 60 ー 300 μg ヒトIgG 形状およびタイプに対する仕様 種類 MonoSpin S型＊1 MonoSpin FF＊2 MonoSpin L MonoSpin 型 96 ウェルプレート型 ディスクサイズ Φ4.2×1.5 mm Φ4.2×1.5 mm Φ9×3 mm Φ4.2×1.5 mm サンプル溶液量 800 μLまで 800 μLまで 8 mLまで 800 μLまで 溶出液量 50～800 μL 50～800 μL 0.5～8 mL 100～800 μL 使用時遠心力 2,000～10,000 ×g 1,000 ×g 1,000 ×g 1,000～5,000 ×g ＊1：MonoSpin ProA, MonoSpin ProG は仕様が異なります。詳しくは15ページを参照してください。 ＊2：FF仕様はMonoSpin C18 FFのみです。 適応サンプル MonoSpinシリーズは、生体試料の前処理用スピンカラムとして最適化されています。血液など粘性の高いサンプルをご使用の場合 は、MonoSpin C18 FFを使用してください。サンプルの粘性、液量に応じてカラムを選択してください。 MonoSpin C18の適応サンプル 低 サンプル粘性 高 （例）尿 血清、血漿 全血 MonoSpin C18 （S型/ 96 ウェルプレート型） MonoSpin C18 FF MonoSpin C18 （L型） 注）MonoSpin FFにおいて、血液サンプルは20 μLまでを目途に使用してください。 6

アプリケーション MonoSpin C18を用いた尿中アンフェタミン類の精製 サンプル溶液 800 µL 尿 400 µL 遠心 遠心 遠心 遠心 緩衝液（pH 13） 400 µL 各30 sec 1 min 1 min 1 min 溶液を混合し10,000 ×gで1分 遠心後の上清をサンプルとする。 1. コンディショニング 2. 吸着 3. 洗浄 4. 溶出 精製サンプル ①メタノール 300 µL サンプル溶 800 μＬ 緩衝液(pH 13) メタノール-0.1 %ギ酸 ②緩衝液(pH 13) 300 μL 300 μL （1:1, v/v） 100 μL 遠心 : 5,000×g （①→遠心→②の順に操作） 3 Conditions 2 5 7 Column ：InertSustainSwift C18 (3 μm, 150 × 2.1 mm I.D.) Eluent ：A)10 mM HCOONH4(pH 3.3) B) CH3OH 4 6 A/B = 90/10 - 2 min - 90/10 - 13 min - 70/30, v/v 1 Flow Rate ：0.3 mL/min Col. Temp. ：40 ℃ Detection ：LC/MS Sample ： 1. Norephedrine 5. Methamphetamine 2. Ephedrine 6. 3,4-methylenedioxyamphetamine 3. Methylephedrine 7. 3,4-methylenedioxymethamphetamine ※データご提供：広島大学 奈女良先生 4. Amphetamine MonoSpin C18を用いた生体試料中の薬物の回収 サンプル溶液 600 µL 血清 200 µL 10 mMリン酸カリウム 遠心 遠心 遠心 遠心 緩衝液（pH 7.0） 400 µL 各30 sec 2 min 1 min 1 min 溶液を混合し10,000 ×gで1分 1.コンディショニング 2.吸着 3.洗浄 4.溶出 精製サンプル 遠心後の上清をサンプルとする。 ①メタノール 300 µL サンプル溶液 600 μL 水 300 μL アセトニトリル 200 μL ②10 mM リン酸カリウム : 2,300 ×g 緩衝液(pH 7.0) 300 μL 遠心 （①→遠心→②の順に操作） MonoSpin C18 を用いた血清中薬物の前処理 日間再現性（3days n=10） Sample 濃度 回収率 RSD 濃度 回収率 RSD (ng/mL) (%) (%) Sample (ng/mL) (%) (%) Sample 濃度 回収率 RSD (ng/mL) (%) (%) 5 91.2 4.8 5 83.7 3.9 5 83.7 7.0 10 86.1 3.3 10 84.1 7.8 10 81.8 2.8 Desipramine Paroxetine Amitriptyline 50 85.2 5.9 50 83.9 8.2 50 83.8 3.0 250 88.4 6.5 250 86.7 7.5 250 88.4 2.7 5 96.3 9.5 5 85.7 8.1 5 97.9 9.0 10 95.8 1.5 10 84.7 3.2 10 95.5 8.5 Imipramine Maprotiline Sulpiride 50 94.5 0.9 50 88.6 5.4 50 90.8 2.6 250 95.9 0.9 250 87.5 7.7 250 92.6 3.0 5 96.8 11.6 5 106.3 9.9 10 87.1 5.0 10 104.8 6.7 Fluvoxamine Duloxetine 50 86.8 8.1 50 99.8 8.7 高い再現性をもって 250 87.5 9.7 250 99.8 6.0 処理することが可能です。 7

アプリケーション MonoSpin C18を用いたタンパク質消化物の脱塩 サンプル溶液 最大 800 µL トリプシン消化後のサンプルに 遠心 遠心 遠心 遠心 終濃度が0.1 %になるように 各1 min TFA 2 min 1 min 2 min を添加する。 1.コンディショニング 2.吸着 3.洗浄 4.溶出 脱塩サンプル 遠心 : 2,300 ×g ①アセトニトリル 200 µL サンプル溶液 0.1 %TFA水溶液 60 %アセトニトリル ②0.1 %TFA水溶液 200 µL 最大 800 μＬ 200 μL 200 μL （①→遠心→②の順に操作） Conditions Column ：Inertsil ODS-3 (3 μm, 150× 2.1 mm I.D.) Eluent ：A)H2O (0.1 % TFA) B)CH3CN (0.1 % TFA) A/B = 90/10 - 20 min - 50/50 Flow Rate ：0.2 mL/min Col. Temp. ：40 ℃ Detection : UV 210 nm Sample ：Digested BSA 2 µL MonoSpin C18 を用いることで、消化物中に 含まれる高濃度の変性剤、塩を除去すること ができます。 MonoSpin Trypsin HPによるBSAの迅速消化 ■還元アルキル化プロトコル例 Conditions 1 mg 牛血清アルブミン Column ：Inertsil ODS-3 ----- 500 mM Tris-HCl(pH 8.0) – 8 M 1 175 µL (3 μm, 150× 2.1 mm I.D.) 尿素（溶液 とする） ----- 40 mg/mL Eluent ：A)H O (0.1 %HCOOH) ジチオスレイトール in 溶液1 25 µL 2 ----- Incubation at 37 ℃ 90 min B)CH3CN (0.1 %HCOOH) ----- 40 mg/mL in 1 50 µL A/B = 90/10 - 20 min - 50/50 ヨードアセトアミド 溶液 ----- Incubation at 37 30 min Flow Rate ：0.2 mL/min ℃ （遮光下で行う） Col. Temp. ：40 ℃ 還元アルキル化タンパク質 250 µL Detection ：UV 210 nm ----- 50 mM 重炭酸アンモニウムで終濃度が Sample ：Digested BSA 2 µL 2 M 尿素になるように希釈（750 µL） MonoSpin Trypsin HP 注）還元アルキル化の手法はタンパク質の種類などによって最適化してください。 ●溶液消化 （37 ℃、10時間） ●MonoSpin Trypsin HPで消化 （室温25 ℃、10分） トリプシン固定化スピンカラムで 室温・短時間（10分）の消化を実現できます。 注）消化には、必ず還元アルキル化処理後のタンパク質をサンプルとしてください。 8

アプリケーション MonoSpin SCX を用いたタンパク質消化物の分画 2次元クロマトグラフィーのような複雑な装置を用いることなく、スピンカラムによる遠 心処理と塩濃度のステップ溶出により、ペプチドの分画処理を行うことができます。 サンプル溶液 500 µL MonoSpin C18 で 脱塩後、0.1 % ギ酸で 遠心 遠心 再溶解したペプチド 30 sec 13 0m sinec サンプル 1.コンディショニング 2.吸着 3.溶出 遠心 : 10,000 ×g 0.1 % ギ酸 300 μL ペプチドサンプル 500 μＬ 溶出液をアプライ、遠心後、新しい回収用チューブを装着して次の溶出液をアプライする。 各溶出液組成 ①25 mM HCOONH4 200 µL ④500 mM HCOONH4 200 µL ②50 mM HCOONH4 200 µL ⑤1 M HCOONH4 200 µL ③100 mM HCOONH4 200 µL 注）各溶液とも10 %アセトニトリルを含む。 Conditions Column ： I nertsil ODS-3 (3 μm, 2.1 ×150 mm) Detection ：UV 210 nm Eluent ： A )H2O (0.1 % HCOOH) Flow Rate ：0.2 mL/min B)CH3CN (0.1 % HCOOH) Col. Temp. ：40 ℃ 塩濃度の異なる溶出液をアプライすることで A/B = 90/10 - 20 min - 50/50 Injection Vol. ：2 µL ペプチドサンプルの分画を行うことが可能です。 MonoSpin NH2を用いたピリジルアミノ化糖鎖の精製 サンプル溶液 800 µL アセトニトリル終濃度が 遠心 遠心 遠心 遠心 90～95 %になるように 各1 min 1 min 1 min 1 min サンプルを溶解 1.コンディショニング 2.吸着 3.洗浄 4.溶出 精製サンプル 遠心 : 2,300×g ①50 %アセトニトリル サンプル溶液 90 %アセトニトリル 50 %アセトニトリル (0.1 % ギ酸＊) 500 μL 800 μＬ (0.1 % ギ酸＊) (0.1 % ギ酸＊) ②90 %アセトニトリル 500 μL 50～800 μL (0.1 % ギ酸＊) 500 μL （①→遠心→②の順に操作） ＊：添加する酸は、ギ酸の他、酢酸やTFAも使用可能です。 Conditions Column ：NH2 Column (5 μm, 250 × 4.6 mm I.D.) Eluent ：A)H2O/CH3CN ＝5/95 0.1 % HCOOH B) H2O/CH3CN ＝95/5 0.1 % HCOOH A/B = 90/10-10 min–90/10-40 min-60/40 Flow Rate ：1 mL/min Detection ：FL Em 320 nm, Ex 400 nm Injection Vol. ：1.5 µL 9

アプリケーション MonoSpin CBAによるパラコート、ジクワットの精製 サンプル溶液 600 µL 遠心 遠心 遠心 遠心 尿 200 µL 10 mM 30 sec 30 sec 30 sec×2回 30 sec リン酸カリウム 緩衝液（pH 7.0） 400 µL 1.コンディショニング 2.吸着 3.洗浄 4.溶出 精製サンプル 10 mM リン酸カリウム サンプル溶液 10 mM リン酸カリウム 1 % 塩酸、30 % メタノール 緩衝液（pH 7.0） 200 µL 600 μＬ 緩衝液（pH 7.0） 200 µL 69 % 水 200 μL 遠心 : 10,000 ×g Conditions Column ：Inertsil ODS-3 (5 μm, 150 mm× 4.6 mm I.D.) Eluent ：0.2 M H3PO4, 0.1 M (C2H5)2NH, 7.5 mM IPCC08(IPCC-0.8, Sodium 1-Octanesulfonate) /CH3CN=89/11 Flow Rate ：1 mL/min Col.Temp. ：40 ℃ Detection ：UV 290 nm Injection Vol. ：50 µL MonoSpin C18を用いた血清中のホルモンの回収 サンプル調製 血清 190 µLに1 mg/mL 遠心 遠心 遠心 遠心 アドレノメデュリンを10 µL添加 各30 sec 1 min ↓ 1 min 1 min 0.1 %TFA水溶液を200 µL添加後、 1. コンディショニング 2. 吸着 3. 洗浄 4.溶出 精製サンプル 10,000 ×gで1分間 ①アセトニトリル 200 μL サンプル調製した 0.1 % TFA水溶液 0.1 % TFAを含む ②0.1 % TFA水溶液 200μL 上清 400 µL 200 µL 60 % アセトニトリル水溶液 遠心分離後の上清をサンプルとする。 （①→遠心→②の順に操作） 200 μL 遠心 ： 2,300 ×g Conditions Column ：InertSustain C18 ( 2 μm, 50 ×2.1 mm I.D.) アドレノメデュリン Eluent ：A）0.1 % TFA in H2O B）0.1 % TFA in CH3CN A/B = 85/15 – 5 min – 50/50 －2 min－50/50 Flow Rate ：0.2 mL/min Col. Temp. ：40 ℃ Detection ：UV 210 nm Injection Vol. ：10 μL 0 2 4 6 Time (min) 10

アプリケーション MonoSpin PBAによるカテコールアミンの精製 サンプル溶液 250 µL サンプル溶液 （尿もしくは血清） 200 µL 遠心 遠心 遠心 遠心 1 M リン酸水素二カリウム水溶液 （リン酸でpH 8.0 に調整） 50 µL 各1 min 1 min 1 min 1 min 1.コンディショニング 2.吸着 3.洗浄 4.溶出 精製サンプル 遠心 : 10,000 ×g ①1 % 酢酸水溶液 200 µL サンプル溶液 100 mM リン酸水素 1 % 酢酸水溶液 ②100 mM リン酸水素 250 μＬ 二カリウム水溶液 200 μL 二カリウム水溶液 （リン酸でpH 8.0 に調整） 200 µL （リン酸でpH 8.0 に調整） 200 µL （①→遠心→②の順に操作） Conditions Column ：Inertsil ODS-3 (5 μm, 150 mm×2.1 mm I.D.) Eluent ：50 mM Phosphate buffer (pH 5.6) 50 mg/L EDTA, 600 mg/L IPCC-008 -10 % CH3OH Flow Rate ：0.3 mL/min Col. Temp.：35 ℃ Injection ：5 µL Detection. ：ECD Pulse Mode Sample ：1. Noradrenaline 2. Adrenaline 3. DHBA 4. Dopamine MonoSpin PBA を用いることで、カテコールアミンなどのシス型ジオールを有する化合物を選択的に回収、 精製することができます。詳細は弊社ホームページ「テクニカルノートLT093」を参照してください。 MonoSpin TiOを用いたヒト血清中の有機リン系農薬の精製 サンプル溶液 50 µL サンプル 10 µL 遠心 遠心 遠心 遠心 各1 min 1 min×2回 各1 min 1 min 水 40 µL 1.コンディショニング 2.吸着 3.洗浄 4.溶出 精製サンプル サンプル溶液 50 μL ①溶液 50 µL 2 % アンモニア水 N-acetyl-O-methyl 化 遠心 : 5,200×g ①80 % アセトニトリル（0.1 % TFA） 50 µL ②50 % アセトニトリル（0.1 % TFA） 50 µL →液を回収して再度 ②溶液 50 µL 50 μL してLC/MSへ （①→遠心→②の順に操作） カラムにのせます （①→遠心→②の順に操作） 処理前 MonoSpin TiOで処理後 Conditions Column ：ODS Column (150 ×2.1 mm I.D.) Eluent ：A)CH3OH B)20 mM HCOONH4 (pH 3.0) A/B = 15/85, v/v Flow Rate ：0.2 mL/min Detection ：SIM Injection Vol. ：5 µL Sample ：1. Bialaphos 2. Glyphosate 3. MPPA 4. Glufosinate MonoSpin TiO は化合物中のリン酸部位に対して選択性を示します。 5. AMPA 11

アプリケーション タンパク質の回収、負荷量の確認 再吸着 サンプル調製 InsulinもしくはBSAを 遠心 遠心 遠心 遠心 0.1 % TFA水溶液で 各1 min 1 min 1 min 1 min 各濃度になるように調製する。 1. コンディショニング 2. 吸着 3. 洗浄 4.溶出 精製サンプル 遠心 ： 2,000×g ①アセトニトリル 300 μL サンプル溶液 C H OH/H O/TFA 0.2 % TFA in H O 2 5 2 ②0.2 % TFA in H2O 300 μL 2 300 µL =60:40:0.1 300 µL 300 µL （①→遠心→②の順に操作） Insulin 負荷量 負荷量オーバー BSA負荷量 MonoSpin C18を用いることで 最大負荷量 4 mg/mL 300 μL タンパク質の回収も簡便に行うことが （サンプル量：1.2 mg） 90 % 負荷量オーバー 回収率 できます。 最大負荷量 0.1 mg/mL （サンプル量：0.03 mg 詳細は弊社ホームページ 「テクニカル ） 回収率 86 % ノート LT157」を参照してください。 Concentration(mg/mL) Concentration(mg/mL) MonoSpin C18FFを用いた全血サンプルの分析 サンプル調製 全血 0.3 mLと300 mM リン酸緩 遠心 遠心 遠心 遠心 衝液(pH 10.0) 1.2 mLを混合する。 1 min 1 min 1 min 1 min ↓ 12,000 ×gで5分間 遠心分離後の 1. コンディショニング 2. 吸着 3. 洗浄 4.溶出 精製サンプル ①メタノール 300 μL サンプル調製した 300 mM リン酸緩衝液 メタノール 100 μL 上清をサンプルとする。 ②300 mM リン酸緩衝液 上清 1 mL (pH 10.0) 300 µL (pH 10.0) 300μL （①→遠心→②の順に操作） 遠心 ： 1,000 ×g a-PBP a-PPP (m/z 218) 2000000 (m/z 204) a-PVP 1500000 (m/z 232) a-PHP (m/z 246) a-PHPP 1000000 (m/z 260) a-POP (m/z 274) 500000 0 5 10 15 20 25 min Conditions Column : InertSustain Phenyl (3 μm, 150 ×2.1 mm I.D.) Flow Rate : 0.2 mL/min Eluent : CH3CN-HCOONH4(10 mM, 0.1 % HCOOH) = 25:75 (v/v) Col. Temp. : 40 ℃ Detection : MS(ESI) 12 Area Area

リン脂質吸着用カラム MonoSpin Phospholipid TiO MonoSpin Phospholipid は、優れたリン脂質吸着能力を有したスピンカラムです。 2 ZrO2 血清、血漿試料などを2ステップで簡便・確実に処理できます。 吸着したリン脂質は、回収用溶液をカラムへ流すことで回収することも可能です。 官能基 ： 二酸化チタン、二酸化ジルコニウムコーティング カートリッジ形状 ： S型、L型 トータルイオンクロマトグラム（処理方法の比較） 【特長】  簡単な操作で生体試料中のリン脂質を除去 除タンパク法で処理 （タンパク質を変性させて遠心し、 できます。 その上清を使用）  90 %以上のリン脂質を除去するため、 LC/MSにおけるマトリックス効果を低減でき ます。 MonoSpin Phospholipidで処理  非常に微量な血清に対して適応することが 90 %以上のリン脂質を除去 できます。  吸着したリン脂質は回収することもできます。 Time （min） 吸着原理 金属酸化物とリン酸化合物の特異的な相互作用によってリン脂質が充填剤に保持されます。 疎水性 親水性 塩基 リン脂質 長鎖脂肪酸 グリセロール リン酸基 （極性イオン官能基） 相互作用 TiO2 ZrO2 Monolith 操作方法 サンプル調製 2 mLマイクロチューブに 遠心 遠心 0.1 % ギ酸-アセトニトリル：血清=4：1を混合 遠心 ： 3,000 ×g ↓ 30 sec 30 sec 10,000 ×g で30秒間 遠心後の上清を 1. コンディショニング 2. 吸着 脂質除去後のサンプル サンプルとする。 0.1 % ギ酸-アセトニトリル サンプル溶液 50 μL 200 μL ＊吸着したリン脂質はアンモニア-メタノール溶液により回収することが可能です。 関連製品 FastRemover for Phospholipid ろ過による除タンパク処理ができ、リン脂質を除去する機能を持つ96ウェルフィルタープレート 製品も用意しています。詳細はお問い合わせください。 13 Intensity, cps

アプリケーション参考文献 種類 対象成分 参考文献 [1-(5-fluoropentyl)-1H-indol-3-yl](4-methyl-1-naphthalenyl)methanone (MAM-2201) Forensic Toxicol., 2013, 31(2), 333–337 α-Pyrrolidinovalerophenone Forensic Toxicol., 2014, 32(1), 68–74 25-Hydroxyvitamin D3 Anal. Sci., 2018, 34(9), 1043-1047 Aconitines and Colchicine Chromatographia, 2015, 78(15), 1041–1048 Amphetamines J. Chromatogr. A, 2008, 1208(1-2), 71-75 Amphetamines Anal. Chim. Acta, 2010, 661(1), 42-46 a-Pyrrolidinovalerophenone (a-PVP) and a-pyrrolidinobutiophenone (a-PBP) Forensic Toxicol., 2014, 32, 68-74 Desalting Amino Acids., 2018, 50(1), 117–124 Desalting Org. Biomol. Chem., 2018, 17(1), 165-171 Desalting J. Proteomics, 2018, 181, 238-248 Desalting J. Pept. Sci., 2018, 24(12), e3133 Desalting of LaIT1 Mass Spectrometry, 2017, 6(1), A0059 Desalting of LaIT1 J. Pept. Sci., 2015, 21(8), 636-643 Dibucaine、Naphazoline J. Chromatogr. B, 2008, 872, (1-2), 186-190 Diquat, Paraquat Anal. Bioanal. Chem., 2011, 400(1), 25–31 Diquat, Paraquat Anal. Bioanal. Chem., 2011, 400(1), 25-31 Drugs J. Chromatogr. B, 2008, 867(1), 99-104 Drugs Chromatographia, 2009, 70(3), 519-526 Eperisone, Tolperisone J.Health Sci., 2010, 56(5), 598-605 Eperisone, Tolperisone, and Tizanidine J.AOAC Int. 2014, 97(6), 1546-1551 Flavonoid J. Chem. Ecol. 2016, 42(12), 1226-1236 glucocorticoids J. Chromatogr. B, 2017, 1057, 62-69 Iodide Am. J. Mod. Chromatogr., 2015, 2(1), 1-6 iTRAQ labeled desalting Int. J. Oncol., 2015, 47(1), 384-390 Liraglutide J. Chromatogr. B, 2018, 109, 29-35 MAM-2201 Forensic Toxicology. 2013, 31(2), 333–337 Medicinal toxicants J. Clin. Pharm. Ther., 2017, 42(4), 454-460 N-1-Naphthalenyl-1-pentyl-1H-indole-3-carboxamide Forensic Toxicol., 2015, 33(1), 165–169 C18 Nanoparticles J. Chromatogr. A, 2015, 1404, 141-145 Naringin J. Clin. Pharmacol., 2013, 53(7), 738-745 Organophosphorus compounds Anal. Sci., 2011, 27(10), 999-1005 Oxidized phospholipids J. Lipid. Res., 2017, 58(11), 2229-2237 oxPUFAs Sci. Rep., 2018, 8, 7954 Peptides Cancer Res., 2017, 77(4), 926-936 Peptides Bio protocol. 2015, 5(8), 2015 Peptides Clin. Exp. Nephrol., 2018, 22(4), 782–788 Peptides Biosci. Biotechnol. Biochem., 2017, 81(12), 2237-2243 Peptides Methods Mol. Biol. 2018, 1696, 91-105 Peptides Biosci. Biotechnol. Biochem., 2018, 82(8), 1309-1315 Peptides Data Brief., 2018, 31(17), 604-609 Peptides Data Brief., 2017, 12(11), 252-257 Peptides Bioresour. Technol., 2018, 254, 278-283 Peptides Biomass Bioenergy, 2016, 91, 83-90 Peptides Neurogenetics, 2019, 20(1), 9-25 Peptides J. Proteomics, 2015, 119, 183-195 Peptides Proc. Natl. Acad. Sci., 2018, 115(14), 3646-3651 Peptides Oncogene, 2017, 36(26), 3740-3748. doi: 10.1038/onc.2016.524 Peptides Sci. Rep., 2018, 22, 8(1), 1303 Peptides Sci. Rep., 2016, 6, 26723 Peptides Proteomics, 2013, 13(5), 751-755 Peptides J. Proteomics., 2013, 84(12), 40-51 Phthalate esters J. Pharm. Anal., 2011, 1(2), 92-99 Phthalates J. Pharm. Anal., 2011, 1(2), 92-99 Plant samples Sci. Rep., 2017, 7(1), 1243. doi: 10.1038/s41598-017-01390-3 Purines Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 2018, 37(6), 348-352 Pyrrolidinophenone type designer J. Chromatogr. B, 2013, 30, 942-943 Pyrrolidinophenone-type designer drugs J. Chromatogr. B, 2013, 942-943, 15-20 review Bioanalysis., 2015, 7(17), 2171-2176 14

アプリケーション参考文献 種類 対象成分 参考文献 C18 FF Drugs J. Chromatogr. A, 2017, 1517, 9-17 C18, C18CX Cardiovascular drug Acta Chromatographica, https://doi.org/10.1556/1326.2018.00493 Melamine J. Anal. Sci. Meth. Instrum., 2012, 2, 68-73 C18, SCX Peptides Sci. Rep., 2017, 7(1), 11137 C18, TiO Peptides Int. J. Mol. Sci., 2018, 19(9), 2655 C18, SAX Aamphetamines, Opiates, and THC Forensic Toxicol., 2013, 31(2), 312–321 C18-AX Oxidized Fatty Acids Mod. Chem. Appl., 2015, 3, 3 Arsenite, Arsenate, and Methylarsenate J. Sep. Sci., 2012, 35(18), 2506-2513 C18-CX Clean up J. Occup. Health., 2018, 60(2), 140-147 Drugs J. Sep. Sci., 2011, 34(16-17), 2232-2239 Halogenated compounds Toxicology, 2013, 314(1), 22-9 Amide PA-labelled glycans Bicsci. Biotechnol. Biochem., 2012, 76(10), 1982-1983 CBA clenbuterol Talanta, 2018, 186, 521-526 CBA, Amide Tetrodotoxin Chromatographia, 2014, 77, (9-10), 687–693 nanoparticles J. Sep. Sci., 2015, 38, 283–290 Oligosaccharides Sci Rep. 2017, 26(7) :46099. doi NH2 PA labeled N-glycans Glycoconj. J., 2017, 34(4), 537-544 PA-labelled glycans Plant Biotechnol. J., 2016, 14(8), 1682-1694 Pyridylaminated Oligosaccharides Anal. Sci., 2016, 32(5), 487-490 Adenosine Biosens. Bioelectron., 2013, 15(41), 379-385 Allergenic ingredients Food Control, 2018, 84, 89-96 Catecholamines J. Comp. Neurol., 2016, 524(18), 3849-3864 Catecholamines Food Chem., 2019, 276, 376-382 Catecholamines EBioMedicine., 2016, 8, 60-71 Catecholamines PLoS One, 2018, 13(7), e0201203 PBA Catecholamines J. Chromatogr. B, 2015, 985, 142-148 Catecholamines Biol. Pharm. Bull., 2017, 40(2), 227-233 Catecholamines Biosci. Biotechnol. Biochem., 2018, 82(3), 497-506 Cis-diol groups Anal. Chim. Acta., 2015, 857(1), 64-70 hippocampal monoamines J. Pharmacol. Sci., 2016, 132(4), 249-254 Pyridylamino monosaccharide Bicsci. Biotechnol. Biochem., 2011, 75(7), 1405-1407 Serotonine and Noradrenaline Br. J. Pharmacol., 2015, 172(5), 1250-1262 Phospholipid Farnesyl pyrophosphate Anal. Bioanal. Chem., 2017, 409(14), 3551–3560 ProteinA, G IgG Biochimie., 2018, 145, 113-124 IgG Virology, 2019, 15, 527, 132-140 ProteinG IgG PLoS One, 2017, 12(7):e0181181 IgG Bioanalysis, 2018, 10(18), 1501-1510 Alendronate Legal. Medicine, 2018, 30, 14-20 SAX Deoxyribonucleoside Biotechnol., 2016, 228, 52-57. metabolite of 18 F-THK5351 Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging, 2016, 43(12), 2211-2218 Urinary excretion Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2016, 35(10-12), 559-565. Amino acid Psychiatry Res., 2016, 238, 203-210 Amino acid J. Sep. Sci., 2014, 37(16), 2087-2094 Amino acid Sci. Rep., 2018, 8(1), 14587 Amino acid Orig. Life Evol. Biosph., 2013, 43(2), 99-108 SCX Angiogenic peptide BioSci. Trends, 2016, 10(6), 500-506 Fluoresence derivatization Biomed. Chromatogr., 2012, 26(2), 147-151 iTRAQ-labeled peptides Biochim. Biophys. Acta, 2018, 1865(6), 874-888 Methylated lysine Anal. Bioanal. Chem., 2018, 410(17), 4189–4194 Morphine, Codeine, Dihydrocodeine J. AOAC Int., 2011, 94(3), 765-774. TiO Glyphosate Acta Chromatographica, https://doi.org/10.1556/1326.2018.00513 Protein digestion J. Am. Chem. Soc., 2018, 140(38), 11982-11991 Trypsin Protein digestion Anal. Sci., 2018, 34(4), 397-406 review Forensic Toxicol., 2010, 28(2), 61–68 review Trac. Trends Anal. Chem., 2013, 45, 182-196 review Electrophoresis. 2017, 38(22-23), 2851-2869 review Chromatogr., 2015, 2(1), 79-95 review J. Pharm. Biomed. Anal., 2018, 161, 51-60 15

抗体精製用カラム MonoSpin ProA, MonoSpin ProG シリカモノリスの表面に抗体精製用のアフィニティリガンドが修飾され ており、抗体試料の高速精製を可能にします。硬質のゲルを使用して いるので通液速度が上げられ、短時間での精製が実現できます。 スピンカラムタイプ、96ウェルプレートタイプをラインアップしています。 製品には、精製に必要な各種試薬が付属しています。 【特長】  Protein AとProtein Gの2種類の抗体アフィニティリガンドを用意しており、目的の抗体に合わせて選択できます。  担体としてシリカモノリスを用いるため、高速処理においてもしっかりと目的抗体を保持し回収することが可能です。  溶出時に酸に暴露する時間も短いため、抗体が酸により変性するリスクも大幅に軽減することも可能です。 【仕様】 スルーポア ： 2 µm ProteinA メソポア ： 60 nm ディスクサイズ ： Φ 4.2 ×1.5 mm 親水性ポリマー サンプル溶液量 ： 500 μLまで 溶出液量 ： 50 μL Protein A, Protein G ＊ を固定化しているシリカモノリス表面は、 使用時遠心力 ： 2,300 ×g 親水性ポリマーが修飾されており、タンパク質の非特異吸着 サンプル負荷量 ： 400 μg （ヒトIgG） ＊：96ウェルプレートタイプは減圧吸引（例：-0.015 MPa）でも使用できます。 を抑制し、より純度の高い抗体の回収を可能とします。 形状 スピンカラムタイプ 96 ウェルプレートタイプ ・卓上遠心機（例：2,300×g）約2分で精製可能です。 ・プレート下面を減圧吸引、または遠心操作で精製します。 ・0.4 mg（負荷量）までの少量の精製に適応します。 ・Spinタイプと同じ容量で、より多検体の精製に使用できます。 ラージスピンカラムタイプ ・1本で約16 mgまでの抗体を遠心処理により回収可能です。 ・固相マニホールドによる吸引処理により数百mLのサンプルを数分で処理することが可能です。 16

抗体精製用カラム MonoSpin ProA, MonoSpin ProG 超高速処理で安定した回収を実現 シリカモノリスを用いることで卓上遠心機での短時間の遠心操作により、簡便に抗体を精製することが可能です。 抗体回収時には、中和溶液をあらかじめ回収用チューブへ入れておくことで、酸により回収した抗体を即座に中和することがで きます。そのため、抗体の変性のリスクを大幅に下げられます。 遠心 遠心 遠心 遠心 30 sec 30 sec 30 sec 30 sec 1. コンディショニング 2. 吸着 3. 洗浄 4.溶出 精製液 遠心 : 2,300 ×g CHO細胞の培養液から定量的に抗体濃度を測定した結果を下図に示しています。 精製された抗体は電気泳動の結果から、不純物をほとんど含んでいないことがわかります。 抗体濃度の測定 回収液電気泳動結果例 0.6 回収したポリクローナル 1 2 3 4 5 6 ヒトＩｇＧ抗体 0.5 97.4 kDa 1. マーカー 66.2 kDa 0.4 2. 培養液 45.0 kDa 3. フロースルー 0.3 4. 洗浄 31.0 kDa 0.2 5. 溶出 21.5 kDa 6. 再生 0.1 14.4 kDa 0 0 0.2 0.4 0.6 抗体体添添加加量量(mgm) g MonoSpin ProAによる抗体溶液の濃縮 原液（ ヒトIgG 0.025 mg/mL）の抗体溶液 500 μLをカラムに連続的に10回アプライし、溶出液量100 μLで2回溶出し、各溶 出液の抗体濃度を確認しました。溶出1回目において得られる抗体濃度は原液の50倍に濃縮されており、90 %以上が回収 されています。通過液画分、洗浄画分には抗体の漏出はほとんど見られません。 17 抗抗体体回回収収量量 (ｍmgｇ)

MonoSpin ProA, MonoSpin ProG 溶出液量と抗体回収率の関係 他社製品との比較 MonoSpin ProAでは100 µLの溶出液量で90 %以上の回収率を示します。他社製品では、400 µL以上の溶出液量を必要とす るため、回収液は希釈されてしまいます。また回収率も70 %以下です。 溶出液量 400 μL MonoSpin ProA 200 μL 100 μLで回収率90 %以上 100 μL T社製品 400 μL 400 μLで回収率65 % 200 μL 200 μLでは1回目の溶出で 回収できない 100 μL ※ ※溶出液が回収できませんでした。 G 400 μL 社製品 溶出液が少ないと回収率低下 200 μL 400 μLで回収率70 % 100 μL 回収率（％） 市販抗体溶液中の保存剤の除去 IgG+BSA IgG+Gelatin 0.10 ﾁｬﾝﾈﾙ A -- SﾁPｬﾝDﾈ-2ﾙ0A -- SPD-20A 0.10 2 ﾁｬﾝﾈﾙ A -- ﾁSｬPﾝDﾈ-2ﾙ0A -- SPD-20A MonoSpin処理前 0.04 MonoSpin処理前 0.08 0.04 0.08 MonoSpin処理後 MonoSpin処理後 2 1 3 0.06 0.06 1 ： IgG 1 ： IgG 2 ： BSA 0.02 2 ： Gelatin 0.02 1 3 ： Elution Buffer 3 ： Elution Buffer 0.04 3 0.04 0.02 0.02 0.00 0.00 0.00 0.00 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 Time(min) Time(min) BSAやゼラチンなど、市販抗体溶液に含まれるタンパク質は抗体の誘導体化時にはあらかじめ除去する必要があります。 MonoSpin ProA/ProGを用いることで、抗体溶液を希釈することなく精製することが可能です。 18 Volts Volts Volts Volts

MonoSpin ProA, MonoSpin ProG CHO細胞培養液からの抗体の回収（96ウェルプレート） 96サンプルの処理においても安定した回収率、再現性を得ることができます。 ウェル番号 サンプル量 ： 150 μL（96ウェルプレートにおいて同じサンプルを精製） 溶出液量 ： 150 μL 平均値 ： 回収率 90 % (CV 3.1 %)、抗体濃度 1.3 mg/mL MonoSpin L ProAカラムによる多量抗体サンプルの精製手法 操作方法 １．平衡化バッファーを5 mLカラムにアプライする ２．サンプルを最大8 mL添加する ＊0.2 μmフィルターで処理した後のサンプルを用いてください。 ３．洗浄バッファーを5 mLカラムにアプライする。 ４．溶出バッファーを5 mLカラムにアプライする。 各工程における遠心処理 ： 1500 ×g, 2 min ＊各種バッファーは準備もしくはMonoSpin ProA/G buffer kitを使用 遠心法もしくは、吸引法により16 mgの抗体を簡便に精製することが可能です。 19 吸光度 (Abs)

MonoSpin 96 well plate MonoSpin 96WPは、シリカモノリスディスクを固定化した、多検体前処理用プレートです。 これまでにMonoSpinで使用していたモノリスディスクと同じディスクを固定化しており、スピンカラム使用時と同 様の負荷量、結果が得られやすい仕様に設計しています。 MonoSpin MonoSpin 96WP シリカモノリスゲル 【特長】  MonoSpinスピンカラムと同じゲルを96ウェルプレートへ固定  遠心もしくは吸引（-0.05 MPa以上推奨）での使用が可能  生体試料の迅速前処理が可能  スピンカラムと同様の溶液組成での処理が可能  ラインアップが豊富 【豊富なアプリケーション】  ペプチドサンプルの脱塩精製、分画  生体試料中（尿、血清、血漿）からの薬物の回収  タンパク質の回収、精製  カテコールアミンの精製  iTRAQ誘導体化後の精製  有機酸の回収、精製  糖鎖の精製 品 名 入 数 Cat.No. 価 格 MonoSpin 96WP C18 1枚 5010-21900 43,000 MonoSpin 96WP NH2 1枚 5010-21901 43,000 MonoSpin 96WP PBA 1枚 5010-21902 50,000 MonoSpin 96WP SAX 1枚 5010-21903 43,000 MonoSpin 96WP SCX 1枚 5010-21904 43,000 MonoSpin 96WP Amide 1枚 5010-21905 43,000 MonoSpin 96WP CBA 1枚 5010-21906 43,000 MonoSpin 96WP C18-CX 1枚 5010-21907 43,000 MonoSpin 96WP C18-AX 1枚 5010-21908 43,000 20